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上海恒遠(yuǎn)解說Elisa實(shí)驗(yàn)洗滌重要性

更新時(shí)間:2015-04-13   點(diǎn)擊次數(shù):1130次

 上海恒遠(yuǎn)解說Elisa實(shí)驗(yàn)“洗滌"重要性

 洗滌

    洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來 達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑 料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可 以說在 ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格 按要求洗滌,不得馬虎。

    洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的, 非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié) 合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì) 回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20,其濃 度可在 0.05%-0.2%之間,高于 0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn) 的靈敏度。

    洗板時(shí)注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應(yīng)按要求稀釋,所用的水電 導(dǎo)率在 1.5us/cm 之下,洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。保證洗板浸泡時(shí)間為 40 秒左 右,孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。


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